طريقة التخفيف بالاوساط الزرعية الصلبة
agar plate dilution method
تستخدم هذه الطريقة لقياس التركيز الأدنى المثبط لنمو البكتريا حيث إن الأطباق الزرعية الصلبة تكون محتوية عادة على تخافيف مضاعفة من المضاد الحيوي تحت الاختبار.
وتعد هذه الطريقة أكثر أمانا من الأسلوب المتبع في الأنابيب.
حيث يمكن هنا ملاحظة أي مصدر للتلوث أثناء العمل من خلال نمو البكتيريا الغريبة على سطح الوسط الزرعي الصلب.
وتلقح هذه الأطباق عادة من أوساط الزرع السائلة بعد أن تجري عليها عملية التخفيف 1/100.
حيث تؤخذ منها ملء العروة الناقلة loopful معلق البكتريا.
وتزرع على الأطباق ذات التخافيف المختلفة من المضاد الحيوي.
وتحضن هذه الأطباق في درجة حرارة 37 م لمدة 18 ساعة وتقرأ النتائج.
وكلما زاد احتمال توقف البكتريا عنده عن النمو لذا نبدأ بالقراءة من أقل تخفيف إلى أعلاه.
ونلاحظ الطبق الذي توقف عنده نمو البكتلريا حيث يحتوي على أقل تركيز مثبط من المضاد.
agar plate dilution method
تستخدم هذه الطريقة لقياس التركيز الأدنى المثبط لنمو البكتريا حيث إن الأطباق الزرعية الصلبة تكون محتوية عادة على تخافيف مضاعفة من المضاد الحيوي تحت الاختبار.
وتعد هذه الطريقة أكثر أمانا من الأسلوب المتبع في الأنابيب.
حيث يمكن هنا ملاحظة أي مصدر للتلوث أثناء العمل من خلال نمو البكتيريا الغريبة على سطح الوسط الزرعي الصلب.
وتلقح هذه الأطباق عادة من أوساط الزرع السائلة بعد أن تجري عليها عملية التخفيف 1/100.
حيث تؤخذ منها ملء العروة الناقلة loopful معلق البكتريا.
وتزرع على الأطباق ذات التخافيف المختلفة من المضاد الحيوي.
وتحضن هذه الأطباق في درجة حرارة 37 م لمدة 18 ساعة وتقرأ النتائج.
وكلما زاد احتمال توقف البكتريا عنده عن النمو لذا نبدأ بالقراءة من أقل تخفيف إلى أعلاه.
ونلاحظ الطبق الذي توقف عنده نمو البكتلريا حيث يحتوي على أقل تركيز مثبط من المضاد.
الهدف من طرق تخفيف المرق والأجار agar هو تحديد أقل تركيز للعامل المضاد للميكروبات (الحد الأدنى من التركيز المثبط، MIC) الذي، في ظل ظروف اختبار محددة، يثبط النمو المرئي للبكتيريا التي يتم فحصها.
تُستخدم قيم MIC لتحديد حساسية البكتيريا للأدوية وأيضًا لتقييم نشاط العوامل الجديدة المضادة للميكروبات.
يتضمن تخفيف أجار دمج تركيزات مختلفة من المادة المضادة للميكروبات في وسط أجار المغذيات متبوعًا بتطبيق عدد موحد من الخلايا على سطح صفيحة أجار.
لتخفيف المرق ، الذي يتم تحديده غالبًا في شكل لوحة ميكروتيتر 96 جيدًا، يتم تلقيح البكتيريا في وسط نمو سائل في وجود تركيزات مختلفة من عامل مضاد للميكروبات.
يتم تقييم النمو بعد الحضانة لفترة زمنية محددة (16-20 ساعة) ويتم قراءة قيمة MIC.
ينطبق هذا البروتوكول فقط على البكتيريا الهوائية ويمكن إكماله في 3 د.
طريقة Agar- تخفيف حاليا هي طريقة الحساسية المعيارية المرجعية للبكتيريا اللاهوائية.
يتم إجراء الاختبار في طبق بتري لتحديد MICs للعديد من السلالات المختبرة في لوحة واحدة.
من خلال هذا الاختبار ، يتم تحضير العديد من عوامل المضادات الحيوية عادة في سلسلة تخفيف مزدوجة ويتم دمجها في لوحات متوسطة أجار منصهرة بتركيزات مختلفة.
ثم تم إجراء تلقيح للوسط بتعليق معياري معدل إلى 0.5 معيار McFarland يحتوي على تركيز 5 × 108 CFU mL− 1 (CLSI ، 2012a).
يتم تخفيف البكتيريا إلى حوالي 107CFU mL1، ويتم رصد 2 ميكرولتر بنقاط متعددة في لوحات أجار تحتوي على حوالي 104 CFU / بقعة (معهد المعايير السريرية والمخبرية، 2015)، ولوحة أجار واحدة تستخدم كبذور تحكم بدون عامل مضاد للجراثيم.
بعد الحضانة في الظروف اللاهوائية عند 35 درجة مئوية لمدة 16-18 ساعة للبكتيريا غير الحساسة ولمدة 18-24 ساعة للكائنات الدقيقة، يتم فحص ألواح الآجار عن طريق مقارنة النمو بصريًا.
يتم تحديد MICs بناءً على هذا الاختبار على أنها أقل تركيز للعقار الذي تم اختباره والذي أوقف نمو البكتيريا.
حاليًا ، تعتبر تقنية تخفيف الآجار بمثابة اختبار الحساسية المرجعي الموصى به من قبل CLSI للبكتيريا شديدة الحساسية مثل Helicobacter spp. and Campylobacter (CLSI، 2010؛ CLSI، 2017) والبكتيريا اللاهوائية (CLSI، 2012b) ولتقييم الحساسية لمضادات الفطريات (Benkova et al.، 2020).
في الدراسة التي أجراها Liu et al، تم مقارنة طرق نشر القرص وتخفيف الآجار المستخدمة في النيسرية البنية AST.
أظهرت النتيجة التي تم الحصول عليها وجود ارتباط جيد وتم الحصول على اتفاقيات قاطعة المستوى بين اختبار انتشار أجار وطريقة تخفيف أجار القياسية.
تتمثل ميزة طريقة تخفيف الآجار في ملاءمتها عندما يتم اختبار عدد قليل من العوامل المضادة للبكتيريا ضد عدد كبير من الكائنات الحية الدقيقة.
عيب واحد من طريقة أجار التخفيف هو مضيعة للوقت ودرجة عالية من الخطأ المتأصل.
