طريقة التحليل الكروماتوجرافي السائلة ذات الضغط العالي

طريقة التحليل الكروماتوجرافي السائلة ذات الضغط العالي

 High Pressure Liquid Chromatographic Methods

تم تحليل عدد من مركبات الفلوروكينولينات في بلازما الدم باستخدام عمود من نوع (HS C18) حيث تم استخدام طور متحرك مكون من الأسيتونيتريل وفوسفات الصوديوم ثنائية الحمضية (عند pH = 3.0) و sodium dodecyl sulfate (SDS) و sodium 1-octane sulfonate (SOS) وقد تم القياس عند طول موجي 293 نانوميتر باستخدام الأشعة الفوق بنفسجية.

 تم استخدام عمود كروماتوجرافي من نوع (C18 reverse – phase column) لتقدير الجاتيفلوكساسين (GT) حيث استخدم طور متحرك مكون من (0.01 M sodium dodecyl sulfate (SDS) , 10mM tetrabutylammonium acetate (TBAA) , 0.025 M citric acid , 50% acetonitrile) وقد تم القياس باستخدام الأشعة الفوق بنفسجية عند طول موجي 293 نانوميتر، وقد تميزت الطريقة بحساسية عالية حيث كان التركيز المقاس 100 نانوجم / مل في بلازما الدم و 1.0 نانوجم / مل في عينات البول.

 كما تم تقدير كلا من موكسيفلوكساسين وجاتيفلوكساسين وليفوفلوكساسين  باستخدام عمود من نوع ((LichroCART 4-4 pre–column معبأ بـ Lichrospher 100 RP – 18)) حيث استخدم طور متحرك مكون من محلول منظم من الفوسفات (عند pH = 2.5) وثلاثي بيوتيل أمونيوم بروميد TBAmBr والأسيتونيتريل بنسبة (88:12) وقد كانت الطريقة حساسة لتراكيز تصل الى 125 نانوجم / مل بالنسبة للليفوفلوكساسين والموكسيفلوكساسين و 162.5 نانوجم / مل بالنسبة للجاتيفلوكساسين.

أيضا تم استخدام عمود من نوع (Waters AccQ Tag amino acid analysis (column مرتبط مع عمود آخر من نوع Waters Spherisorb ODS-2 guard column) لتقدير كلا من الموكسيفلوكساسين والأوفلوكساسين حيث استخدم مخلوط من الأسيتونيتريل والميثانول و (tetrabutylammonium chloride (TBA.Cl و (trifluoroacetic acid (TFA كطور متحرك.

 وفي عام 2006 تم تقدير عدد من مركبات الفلوروكينولين باستخدام عمود من نوع (LiChrospher 100RP-18 column) حيث تم مزج الماء مع الأسيتونيتريل بنسبة 80:20 مع ثلاثي إيثيل أمين  وضبط الرقم الهيدروجيني عند pH = 3.3 باستخدام حمض الفوسفوريك واستخدم المخلوط كطور متحرك حيث تم فصل عدة مركبات في خمس دقائق، وقد تم القياس باستخدام الأشعة الفوق بنفسجية حيث وجد أن قيمة معامل الإرتباط r ≥ 0.9999  وتتراوح التراكيز المقاسة من 4.0 الى 24.0 ميكروجم / مل، أما قيمة معامل الإنحراف النسبي فقد كان أقل من 1.0  % ونسبة الإسترجاع 99.54 %.

كما استخدمت طريقة لتقدير الجاتيفلوكساسين تتضمن استخدام كروماتوجرافي الطبقة الرقيقة مرتبطة مع HPLC حيث استخدمت طبقة الألومينا مع السيليكا جل (60F-245) كطور ثابت أما الطور المتحرك فهو عبارة عن مخلوط من البروبانول والميثانول والأمونيا بنسبة (5 :1 :0.9) وتم التقدير عند طول موجي 292 نانوميتر، حيث كانت الطريقة حساسة لتراكيز تتراوح من 400 الى 1200 نانوجم / spot ومعامل الإرتباط r = 0.9953 وحد الإكتشاف 2.73 و 8.27 نانوجم / spot على التوالي.

 وفي عام 2006 قام العالم صالح وآخرون (57) بتقدير الجاتيفلوكساسين باستخدام طور ثابت عبارة عن X Terra MS C18 وطور متحرك مكون من فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدية والأسيتونيتريل بنسبة (80:20 v/v )، حيث تم التقدير باستخدام الأشعة الفوق بنفسجية عند طول موجي 293 نانوميتر، وقد كانت الطريقة حساسة لتراكيز تتراوح من 0.10 الى 6.0 ميكروجم / مل.