اختبار اكتشاف المستضد المرئي السريع الخاص بضمة الكوليرا.. التسبب في الكوليرا الوبائية وجائحة الكوليرا

لدى سلالات ضمة الكوليرا المنتمية إلى الزمرات المصلية O1 وO139 القدرة على التسبب في الكوليرا الوبائية وجائحة الكوليرا.

تنقسم الزمرة المصلية O1 فرعيًا إلى نمطين مصليين وهما أوغاوا وإينابا.

إن الزمرة المصلية O139 التي ظهرت في الهند عام 1992 قد انتشرت سريعًا بين كل الدول الآسيوية وتعتبر ثامن سلالة جائحة كامنة للكوليرا.

وللتشخيص الفوري للكوليرا أهمية كبرى في بدء علاج فعال وتأسيس تدابير وبائية مناسبة.

هناك مؤشرات نهائية تقول بأن معدل وقوع هذه الزمرة المصلية في أعلى مستوياته داخل الهند وبنجلاديش.

قد أجرى وصف العديد من الاختبارات التشخيصية السريعة لاختبار الكوليرا.

اكتشفت بعضها ذيفان الكوليرا.

واكتشفت الأخرى مستضد عديد السكاريد الشحمي (LPS) لضمة الكوليرا O1 أو O139.

مؤخرًا، قد تم أيضًا تطوير المقايسة المناعية متعددة الخطوات بمقياس اللون القائم على الذهب الغراوني المعروفة باسم SMART  للكشف المباشر عن ضمة الكوليرا O1 أو ضمة الكوليرا O139 في عينات البراز وأظهرت أن الحساسية %95 والنوعية %100 لسلالة O1 والحساسية 100% والنوعية 97% لسلاسة O139.

الأهمية السريرية:

من الناحية السريرية، قد تتراوح الكوليرا من الاستعمار عديم الأعراض إلى الإسهال الحاد مع فقد كبير في سوائل الجسم، مما يؤدي إلى الإصابة بالجفاف واضطرابات الكهارل والوفاة.

القاعدة:

هذا الاختبار عبارة عن اختبار اكتشاف المستضد المرئي السريع للاستشراب المناعي الخاص بضمة الكوليراباستخدام عينات من البراز.

غشاء النيتروسليلوز مغلف بالأجسام المضادة أحادية التسيلة ضد مستضد عديد السكاريد الشحمي (LPS) لضمة الكوليرا O1 وO139 كشريطين متميزين.

عند تدفق عينة الاختبار من خلال غشاء النيتروسليلوز، تقترن جسيمات الذهب الغرواني مع الأجسام المضادة أحادية التسيلة ضد مستضد عديد السكاريد الشحمي (LPS) لضمة الكوليرا O1 وO139 المرتبطة بالمسضدات ذات الصلة من عينة الاختبار، إذا كانت موجودة.

يتحرك المعقد الضدي المستضدي عبر غشاء النيتروسليلوز ويرتبط بالأجسام المضادة الثابتة المطابقة المضادة لضمة الكوليرا O1 و/أو O139، ويشكل شريط ماجنتا أحمر اللون، والذي يؤكد على وجود نتائج إيجابية.

يجب أن يظهر شريط اختبار التحكم، بغض النظر عن إيجابية أو سلبية عينة الاختبار، للتحقق من صحة إجراء الاختبار.

المواد والمعدات:

في البلدان المعرضة لخطر أوبئة الكوليرا، فإن الخطوة الأولى في المختبر هي الاستعداد لحدوث وباء محتمل.

ويجب الاستعداد أو الحصول على المستلزمات والمعدات اللازمة لتحديد ضمة الكوليرا O1 و/أو O139 حتى في الأماكن النائية.

وينبغي الاتصال مسبقًا بالمختبر المحلي أو المركز الطبي أو الموقع الميداني الذي سيجرى فيه الاختبار لضمان توفر جميع المستلزمات والمعدات الضرورية ومعدات الوقاية الشخصية (PPE) بسهولة.

المستلزمات والمعدات اللازمة لإجراء الاختبار السريعة مرفقة مع مجموعة أدوات الاختبار السريع:

- غمائس مغلفة على حدة في حقيبة من الألومنيوم مع أنابيب اختبار بلاستيكية مجففة 5 مل تستخدم مرة واحدة فقط لكل عينة.

- ممصات نقل تستعمل مرة واحدة فقط (قطارات بلاستيكية) للبراز.

- حامل أنبوب اختبار الرغوة.

- ملحي نظامي معقم أو ماء مقطر يستعمل مرة واحدة فقط، حاويات نظيفة لجمع عينات البراز.

- رفرف بلاستيك ذات حجم مناسب لأنابيب الاختبار (مقترح).

- ساعة أو مؤقت.

- مستلزمات السلامة البيولوجية / معدات الوقاية الشخصية: قفازات مطاطية أو نظارات واقية أو واقي للوجه.

- معطف المختبر.

- إناء مخاطر بيولوجية للفضلات المعدية.

- مطهر.

التخزين:

تخزن مجموعة الأدوات الاختبار السريع في درجة الحرارة المحيطة (من 24 إلى 26) درجة مئوية، إلا أنه من المستحسن تخزينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية عند عدم استخدامها لفترة تمتد إلى ستة أشهر أو أكثر (حسب الجهة المصنعة).

جمع العينات:

يجب جمع عينات البراز في مرحلة مبكرة من المرض المعوي، عندما تتواجد مسببات الأمراض عادة في البراز بأرقام مرتفعة وقبل بدء العلاج بالمضادت الحيوية.

تجمع العينات من أشخاص مشتبع في كونهم جزءًا من تفشي المرض وتنطبق عليهم المعايير التالية:

1- المعاناة من "براز شبيه بماء الأرز".

2- ظهور المرض في أقل من أربعة أيام قبل أخذ العينة.

3- عدم تلقي أدوية مضادة للمكروبات لعلاج مرض الإسهال.

تجمع عينات البراز من المرضى وتوضع في حاويات نظيفة (لا تحتوي على بقايا المواد المطهرة أو المنظفة) محكمة الإقفال ومانعة للتسرب.

ولا ينبغي عدم جمع العينات من أوعية التبول بالفراش، فقد تحتوي على بقايا مواد مطهرة أو أيّ ملوثات أخرى.

وكما ينبغي حفظ عينة البراز في الثلاجة ومعالجتها في غضون مدة أقصاها ساعتين بعد جمعها.

العينات المناسبة:

- البراز السائل، "براز شبيه بماء الأرز" مثالي: براز سائل صاف، يشبه ماء الأرز المسلوق، يمكن رؤيته بشكل تقليدي في حالات الكوليرا.

- البراز اللزج أو الشبيه بالمخاط أو شبه الصلب: مقبول إلا أنه يجب تخفيفه بسائل قبل استخدامه مع محلول ملحي معقم نظامي أو ماء مقطر.

العينات غير المقبولة:

- البراز الصلب: لايوصى به، لأن هذه العينات تحتوي على مواد جسيمية قد تسد غشاء النيتروسليلوز مما يقيد تدفق العينة.

- مسحات من المستقيم: لم يُجرى تقييم مقياس الغميسة للاستخدام مع مسحات المستقيم.

الإجراءات:

1- ارتداء معدات الوقاية الشخصية: معطف المختبر والقفازات المطاطية والنظارات الواقية وواقي الجلد. ينبغي ارتداء معدات الوقاية الشخصية دائمًا أثناء التعامل مع العينة.

2- جمع العينات في كوب بلاستيك: وضع ملصق على الكوب مع معرّف المريض.

3- إزالة أنبوب الاختبار 1 من مجموعة الأدوات ووضع أنبوب الاختبار في رفرف ستيايرفوم أو بلاستيك. ووضع ملصق على أنبوب الاختبار.

4- إزالة قطارة البلاستيك 1 من مجموعة الأدوات. 

5- ملء القطارة بعينة البراز حتى النصف (من 150 إلى 200 ميكرولتر) وتنقل إلى أنبوب الاختبار. ينبغي عدم وضع سائل أكثر من هذا المقدار في أنبوب الاختبار.

6- فتح علبة الاختبار السريع، ووضع ملصق على الغميسة مع معرّف المريض.

7- وضع الغميسة في أنبوب الاختبار مع توجيه الأسهم للأسفل. ينبغي غمر نهاية الشريط في البراز. ينبغي أن تظل الأسهم أعلى مستوى البراز.

8- الانتظار لمدة تتراوح من 15 إلى 20 دقيقة لاستكمال الاختبار. وعند استكمال الاختبار، ينبغي رؤية شريط بالقرب من أعلى الغميسة (شريط تحكم داخلي). 

‎9- مراجعة النتائج وتفسيرها في غضون مدة من 15 إلى 20 دقيقة:

أ)- إيجابية، ضمة الكوليرا O1؛

ب)- إيجابية، ضمة الكوليرا O139؛

ج)- إيجابية، كل من ضمة الكوليرا O1 وO139؛

د)-. سلبية، ضمة الكوليرا O1 وO139؛

هـ)- لم يعمل الاختبار بشكل صحيح (اختبار غير صالح).

ينبغي عدم تفسير نتائج الاختبار بعد 30 دقيقة.

‎-10 وضع جميع الفضلات في حقيبة بلاستيكية مبطنة تبطين ثنائي وعليها ملصق  "مخاطر بيولوجية".

صحيفة إرشادات الاختبار السريع، لتمثيل رسومات بيانية لإجراءات الاختبار:

‎1- السماح بوقت لوصول مجموعة الأدوات إلى درجة حرارة الغرفة قبل فتحها واستخدامها.

‎2- وضع ملصق على أنبوب الاختبار النظيف غير المستخدم مع رمز تعريف المريض. نقل من 150 إلى 200 ميكرولتر من عينة البراز السائل الخاصة بالمريض إلى أنبوب الاختبار.

ملاحظة:

يجب تخفيف العينات اللزج أو الشبيه بالمخاط أو شبه الصلب بمحلول ملحي معقم أو ماء مقطر قبل نقلها إلى أنبوب الاختبار.

‎3- فتح حقيبة الألومنيوم من عند المنطقة المحززة. وإزالة الغميسة.

‎4- وضع ملصق على الغميسة مع رمز تعريف المريض، ينبغي توخي الحذر من لمس المنطقة المحدد عليها سهم (منطقة الغمس).

‎5- وضع الغميسة بعناية في أنبوب الاختبار المحتوي على البراز مع توجيه الأسهم للأسفل.

ينبغي غمر نهاية الشريط في البراز. ينبغي التأكد من ثبات الأسهم أعلى مستوى البراز.

‎6- ترك الغميسة بدون لمسها لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة أو حسب إرشادات الجهات المصنعة.

‎7- يظهر شريط "تحكم" داخلي أحمر ماجنتا في غضون مدة من 15 إلى 20 دقيقة يشير إلى اختبار صالح؛ يشير هذا الخط إلى اكتمال التفاعل.

وجود واحد أو اثنين على الأقل من الخطوط الحماء الماجنتا يشير إلى أن العينة إيجابية بالنسبة  لضمة الكوليرا O1 و/أو ضمة الكوليرا O139.

‎8- قراءة نتائج الاختبار وتسجيلها في غضون مدة من 15 إلى 20 دقيقة.

ينبغي عدم تفسير النتائج بعد 30 دقيقة. (قراءة النتائج وتفسيرها حسب إرشادات الجهات المصنعة).

تفسير النتائج وتقديم تقرير بها:

تفسر نتائج اختبار كل غميسة وفقًا لإرشادات الجهة المصنعة.

يمكن العثور على إرشادات تفسير نتائج الاختبار في الجدول (1-1).

تُسجّل جميع نتائج اختبارات المريض في مستند أو دفتر ملاحظات كسجل دائم.

وينبغي تسجيل النتائج حسب تصنيفها كنتيجة إيجابية أو سلبية أو غير صالحة.

إذا اقتضت الضرورة تكرار الاختبار بسبب أن النتيجة غير صالحة، فينبغي تسجيل النتيجة (غير الصالحة) أولاً وحل المشكلة وتسجيل النتيجة المكررة مرة أخرى.

يقدم تقرير بنتائج الاختبار الإيجابية والسلبية إلى الشخص المناسب في الوقت المناسب.

وينبغي أن يتضمن التقرير أيّ تعليقات أو معلومات يحتاجها هذا الشخص لتقييم نتائج الاختبار تقيمًا صحيحًا.

الجدول: نتائج نتيجة الاختبار المتوقعة للغميسة وتفسير نتائج الاختبار:

نتيجة اختبار الغميسة	التفسير
إيجابية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود أ): يظهر شريطين، واحدًا لشريط اختبار التحكم والآخر لتحديد شريط الاختبار لضمة الكوليرا O1 (Vc O1).	إشارة إلى أن العينة إيجابية فقط لضمة الكوليرا O1.
إيجابية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود ب): يظهر شريطين، واحدًا لشريط اختبار التحكم والآخر لتحديد شريط الاختبار الخاص بضمة الكوليرا O139 (Vc O139).	إشارة إلى أن العينة إيجابية فقط لضمة الكوليرا O139.
إيجابية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود جـ): يظهر ثلاثة أشرطة، واحدًا لشريط اختبار التحكم، وواحدًا لشريط الاختبار الخاص بضمة الكوليرا O1 (Vc O1)، وواحدًا لشريط الاختبار الخاص بضمة الكوليرا O139 (Vc O139)	إشارة إلى أن العينة إيجابية لكل منضمة الكوليرا O1 وO139.
سلبية (الأشكال 3-1 و3-2، العمود د): لا يظهر إلا شريط اختبار تحكم واحد.	إشارة إلى أن العينة سلبيةلضمة الكوليرا O1 وO139.
غير صالحة (الأشكال 3-1 و3-2، العمود هـ): لا يظهر أيّ أشرطة اختبار تحكم	يشير إلى أن هناك خطأ في الإجراءات أو تعرض العينة/الغميسة للتلف أو وجود مواد جسيمية في العينة تمنع تدفق السائل من خلال غشاء النيتروسليلوز.

مراقبة الجودة:

- مصدر الخطأ الشائع:

العينات التي لم تصنف بأنها "سائلة" قد تسد شريط غشاء النيتروسليلوز، وتحد من تدفق السائل، وتمنع تفاعل الغميسة مما يؤدي إلى عدم صلاحية الاختبار.

وينبغي تخفيف هذه العينات أما بمحلول ملحي معقم أو ماء مقطر أو يتم رفضها كعينات غير مقبول لاختبار.

- الاحتياطات:

ينبغي التأكد من إجراء الاختبار وفقا للإرشادات تمامًا، والالتزام بكل الإجراءات.

وتستخدم طريقة تعقيم طوال إجراء الاختبار.

بالإضافة إلى ارتداء قفازات مطاطية ونظارات واقية وواقي للوجه ومعطف مختبر عند معالجة واختبار جميع العينات السريرية.