طريقة الكشف عن السموم الفطرية.. تحضير وسط غذائي سائل مناسب لنمو الفطريات وتعقيمه. تلقيح الفلاسكات بقرص من مستعمرة فطرية نقية حديثة العمر

طريقة الكشف عن السموم الفطرية:

1- يتم تحضير وسط غذائي سائل مناسب لنمو الفطريات ويعقم.

2- تلقح الفلاسكات بقرص من مستعمرة فطرية نقية حديثة العمر.

3- تحضن الفلاسكات عند 27م° لمدة 10 أيام.

4- بعد نهاية فترة التحضين يتم استخلاص السموم الفطرية المحتمل وجودها وذلك بإضافة 50 مل من الكلوروفورم إلى راشح المزرعة ثم وضعها في قمع فصل ورجها لمدة ثلاث دقائق.

5- نلاحظ تكون طبقتين, تؤخذ الطبقة السفلية وترشح باستخدام ورق ترشيح محتوي على كبريتات صوديوم لا مائية.

6- يتم تجفيف الراشح بالمبخر الدوار عند درجة 60 م°.

7- بعد عملية التبخير يضاف 1مل من الكلوروفورم لإذابة المستخلص ثم يوضع في أنابيب صغيرة محكمة الغلق ويحفظ في الفريزر لحين الكشف عن تواجد السموم فيه.

8- للكشف عن وجود السموم نستخدم ألواح الفصل الكروماتوجرافي حيث يتم رسم خط مستقيم على بعد 1سم من الجانب الأيمن والجانب الأيسر ثم تنقط العينة بمقدار 50 ميكروليتر على بعد 2سم من الحافة السفلى باستخدام ماصة زجاجية  وتكرر التنقيط عدة مرات مع مراعاة التجفيف المستمر للنقاط باستخدام المجفف الهوائي.

9- بعد انتهاء عملية التنقيط توضع الألواح في صندوق الفصل الكروماتوجرافي المحتوي على محلول فصل مناسب ثم يغطى الصندوق ويترك في الظلام حتى يصل محلول الفصل إلى ما قبل نهاية الألواح بـ2سم من الحافة العليا.

10- بعد إخراج الألواح توضع في غرفة الأبخرة (الهود) لتتطاير الغازات وتترك في الظلام كي تجف.

11- يتم إدخال الألواح في كابينة الأشعة فوق البنفسجية لفحصها عند طول موجي معين وتحديد النقاط المضيئة ومقارنتها بمحاليل قياسية لمعرفة نوع السم الفطري المتحصل عليه.