اختبار وردية البنغال لداء البروسيلات.. عزل الكائنات الحية الموجودة بالدم أو نخاع العظام أو الأنسجة الأخرى

داء البروسيلات البشري - حمى متموجة أو حمى الملت:

داء البروسيلات عبارة عن عدوى نظامية يمكن أن يصاب بها أي عضو أو جهاز بالجسم.

يصاب البشر من خلال ثلاثة طرق أساسية:

1- ابتلاع منتجات الحليب الحيواني غير المبستر المصاب بالعدوى.

2- استنشاق جسيمات مشبعة بالأيروسول مصابة بالعدوى.

3- التلامس المباشر مع أعضاء الحيوانات المصابة بالعدوى من خلال تمزق الجلد والغشاء المخاطي بما فيها الملتحمة.

داء البروسيلات هو أحد أكثر الأمراض الشائعة التي تنتقل عبر عدوى بكتيرية داخل المعامل، ففي المعامل يكون رش الأيروسول بالمعمل آلية أساسية للانتقال، لذا يتطلب توفير المستوى 3 من السلامة البيولوجية للعزل داخل المعمل.

أشهر الأنواع الممرِضة للبشر هي:

1- البروسيلا المجهضة من البقر.

2- البروسيلا المالطية من الماعز والأغنام.

3- البروسيلا الخنزيرية من الخنازير (الولايات المتحدة).

4- البروسيلا كانز  من الكلاب.

التشخيص المحدد للبروسيلا يتطلب عزل الكائنات الحية الموجودة بالدم أو نخاع العظام أو الأنسجة الأخرى.

ينبغي تحضين الاستنباتات في نسبة ثاني أكسيد كربون تتراوح بين 5% و10% وفي بيئة رطبة ويتم تحضينها لفترة 3 أسابيع قبل التخلص منها كأشياء سلبية.

الطريقة الوسطى لتشخيص البروسيلا هي عن طريق الاختبار السيرولوجي.

بسبب صعوبة عزل الكائن الحي (الاختبار السيرولوجي)، يستخدم اختبار تراص المصل (SAT) على نطاق واسع واكتف وجود أجسام مضادة دالة على البروسيلا المجهضة والبروسيلا المالطية.

يظل اختبار وردية البنغال (اختبار تراص) الخاص بداء البروسيلات اختبار حساسًا ونوعيًا منخفض التكلفة للحالات الحرجة ولكنه غير مفيد في متابعة المرضى أو في تشخيص الانتكاس.

القاعدة:

ودرية البنغال عبارة عن تفاعل اختبار تراص يستخدم في تشخيص داء البروسيلات.

يختبر مصل المرضى مباشرة للتحقق من وجود جسم مضاد باستخدام طريقة الشريحة أو طريقة الأنبوب.

الاختبار وصفي وشبه وصفي. 

يتوفر عدد من المستضدات للاستخدام في اختبار الشريحة السريع.

يتم الاختبار من خلال خلط المصل والمستضد في قطع مربعة الشكل على الشريحة الزجاجية.

يستخدم هذا الاختبار على نطاق واسع واكتشف وجود أجسام مضادة دالة على البروسيلا المجهضة والبروسيلا المالطية.

في حالة الإصابة الحادة، فإن عيار 1:160 أو أكبر في طريقة الشريحة السريعة يعتبر تشخيصًا إذا كانت هذه النتيجة تناسب النتائج السريرية والوبائية.

المواد:

1- مستضدالبروسيلا المجهضة, متعذرة الحياة. الخلايا البكتيرية في محلول ملح مشبع بالفينول والصبغة بنسبة 0.05%.

2- ممصات سيرولوجية، 0.2 ملليلتر مع تدرج 0.1 ملليلتر. سعة 0.1 ملليلتر.

3- شريحة تراص الفئة بقوس.

4- قضبان مطباق خشبية.

5- ملح فيزيولوجي (0.85% كلوريد الصوديوم).

6- هزاز تدويري إن أمكن.

الإجراءات:

جمع العينات:

اجمع من 5 إلى 10 ملليلتر من الدم في أنبوب عادي صغير دون مادة مضادة لتخثر الدم. اترك الدم حتى يتخثر لمدة تتراوح بين 20 و30 دقيقة، يمكن حفظ المصل لمدة تصل إلى 24 ساعة عند درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية.

إذا تطلب الأمر الحفظ لفترات أطول، يتعين التجميد، لا تقم بإعادة التجميد بمجرد إذابة المصل.

يتعين ترك المستضد حتى يدفأ في درجة حرارة الغرفة قبل استخدامه في الاختبار.

A- طريقة الشريحة:

1- وفر 0.08 و0.04 و0.02 و0.01 و0.005 ملليلتر من مصل الاختبار في حلقة منفصلة، باستخدام ممص 0.2 ملليلتر.

2- قم بهز قارورة المستضد لخلط المحتويات تماما.

3- أضف قطرة واحدة من المستضد على كل دائرة، اخلط المستضد والمصل، باستخدام خلالة أسنان أو مطباق لكل دائرة.

4- قم بهز الشريحة لمدة تتراوح من 1 إلى 3 دقيقة (إجراء قفل الأدوات) أو باستخدام هزاز تدويري إن توفر.

5- تقدر درجة التراص في كل حلقة كالتالي:

تسجيل التراص:

درجة التراص:

- 100% - الخلفية واضحة تميل إلى الضبابية قليلاً / 4+

- 75% - الخلفية واضحة تميل إلى العتمة قليلاً / 3+

- 50% - الخلفية متوسطة العتمة / 2+

- 25% - الخلفية معتمة / 1+

- لا - سلبية.

ملاحظة:

أدوات التخزين وأدوات تخزين وردية البنغال عند درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 مئوية والمستضد جاهزة للاستخدام فور توريدها.

الجدول: تحديد عيار الجسم المضاد:

العيار هو أقصى درجات التراص التي تتسبب في حدوث تراص بقيمة (2) أو أكثر.

المصل بالملليلتر	التخفيف المرتبط
0.08	1:20
0.04	1:40
0.02	1:80
0.01	1:160
0.005	1:320

تخفيف المصل الذي يعطي قيمة تراص 2 أو أكثر هو نقطة النهاية أو العيار لهذا المصل.

 قياس العيار عبارة عن تبادل أقصى درجات التخفيف التي تحدث تراصا بقيمة 2 أو أكثر.

يوجد بالجدول التالي أمثلة على نتيجة اختبار وردية البنغال:

الجدول: أمثلة على نتيجة وردية البنغال:

نتيجة اختبار الشريحة
تحضير مصل (بالملليلتر) التخفيف	0.08	0.04	0.02	0.01	0.005	عيارات المصل أو نقطة النهاية الخاصة به
	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320

تفاعل التراص
المصل رقم 1	++++	++++	++++	++	-	1:160
المصل رقم 2	++++	+++	++	-	-	1:80
المصل رقم 3	+++	++	++	_	_	1:80

حدود الإجراء:

1- يقوم اختبار تراص المصل (SAT) بقياس كلاً الأجسام المضادة IgG وIgM في مصل المريض.

2- بعد علاج الأجسام المضادة الخاصة بداء البروسيلات، عادة يستمر العلاج لأكثر من سنة.

3- استخدم 2-المركابتويثانول (يكتشف IgG فقط) لتحديد حالات البروسيلا المزمنة أو الانتكاسية.

4- أي عيار أكبر من 1:40 بالإضافة إلى 2-المركابتويثانول، عدوى نشطة تشير إلى وجود lgG (أي انتكاسات أو عدوى مزمنة).

5- يعتبر العيار الفردي الأكبر من 160 عنصرًا مهمًا.

6- قد تعطي ظاهرة البروزون نتيجة سلبية كاذبة والتي تكون ممكنة بسبب تركيز الأجسام المضادة المرتفع، لذا ينصح بتخفيف المصل لتجنب ذلك.

7- قد يحدث تفاعل إيجابي كاذب من التفاعل المتصالب مع الأجسام المضادة الخاصة بالكوليرا واليرسينيا الفرنسيسيلة.

8- يمكن تجنب النتيجة السلبية الكاذبة والتفاعل الإيجابي الكاذب من خلال التخفيف الروتيني للمصل ليكون بنسبة 1:320.