اختبار وظائف الكبد.. الفسفاتاز القلوي إنزيم تستخدمه الخلايا لتسريع وتيرة التفاعل



الفسفاتاز القلوي عبارة عن إنزيم تستخدمه الخلايا لتسريع وتيرة التفاعل.
وهو يوجد في العظم والمشيمة والكليتين والأمعاء الدقيقة والكبد، ومرتبط بصورة أساسية بأمراض الكبد وانسداد تدفق الصفراء.
ويوجد الفسفاتاز القلوي في الكبد بالقرب من الأنابيب التي تجمع الصفراء أو داخلها.

القاعدة:
‎‎Phenyl phosphate-----------ALP-------- phenol + phosphate ‎‎

ينطلق الفينول الحر من خلال حلمهة تفاعلات الركيزة ثم يصاحبه 4-أمينو-أنتيبيرين في وجود مادة قلوية.

يكون فيروسيانيد البوتاسيوم مركب أحمر اللون يتناسب امتصاصه المقدر بحوالي 510 نانومتر مباشرة مع نشاط الفسفاتاز القلوي.
تطبل أرسينات الصوديوم المدمجة في الكاشف نشاط الإنزيم الإضافي وتمنع تخفيف اللون الملازم في الطرق السابقة.

العينة:
العينة الموصى بها: 20 ميكرولتر من المصل أو البلازما المعالجة بالهيبارين.
قم بجمع العينات بواسطة تقنية بزل الوريد القياسية.

قم بحفظ العينات في حاويات مغلقة لتجنب حدوث تلوث أو تبخر.
اتبع الاحتياطات العالمية عند القيام بالفصد أو التعامل مع عينات المريض أو ما تم معايرته أو أي منتجات أخرى أساسها هو مصل الدم.

تخلص من المواد الملوثة بالنفايات المسببة للعدوى.
يجب عدم استخدام العينات ذات الانحلال الدموي، كما يجب عدم استخدم العينات التي مضى عليها أكثر من 7 أيام بسبب فقد نشاط الإنزيم في 7 أيام.

إذا تجاوز التغيير في الامتصاص لكل دقيقة 0.250، قم بتخفيف 0.1 مل من العينة في 0.5 مل من مالح عادي وكرر المقايسة باستخدام هذا التخفيف.
قم بضرب النتيجة في 6 لمعرفة نشاط الفسفاتاز القلوي.

الكواشف والمواد:
1- جهاز تحليل آلي بالكامل أو مقياس الطيف الضوئي.
2- أنبوب من الجل (مادة لتسريع التجلط).
3- جهاز طرد مركزي.
4- الكواشف:

كاشف 1

ركيزة منظمة

فينيل فوسفات ثنائي الصوديوم

منظم كربونات-ثنائي الكربونات

مثبت P H 10

 

5 ملي مول/ لتر‎‎

50 ملي مول/ لتر‎‎

كاشف 2

المعيار

فينول

20 وحدة/ لتر

كاشف 3

الكاشف المحصر

4-أمينو أنتيبيرين

60 ملي مول/ لتر‎‎

أرسينات الصوديوم

240 جرام/ لتر

كاشف 4

كاشف صبغي

فيروسيانيد البوتاسيوم

150 ملي مول/ لتر

‎‎  المعايرة‎‎:
‌1- ‎‎تفريغ وغسيل الكفيت من خلال الضغط على (WASH) الموجود على شاشة LCD‎‎.
سوف يحدث رجوع تلقائي لقائمة التحديد.
2- ‎‎ادفع كمية صغيرة من خلال الضغط على الرافعة (P) لتفريغ نظام الأنبوب.‎ لا تقم بسكب أي محلول.

3- قم بقياس 1000 ميكرولتر على وجه التحديد من الماء المقطر في كوب عينة ثم اسكب الماء المقطر بدفع كمية بالضغط على الرافعة [P].
سوف يتم تلقائيًا قياس 1000 ميكرولتر من حجم الكمية المسكوبة في الكفيت المتدفق.

4- سوف يتم عرض طول الانتقال الخاص بالهواء والماء على الشاشة.
5- اضغط [↵] لإنهاء عملية المعايرة.
سوف يعود البرنامج إلى قائمة تحديد الطريقة.

مراقبة الجودة:
1- عند بداية كل نوبة عمل قم بتفعيل مواد رقابة الجودة على المجالات الطبيعية وغير الطبيعية (ضوابط رقابية عالية ومتدنية)‎.
اعمل دائمًا على تفعيل مجموعة من الضوابط الرقابية بعد معايرة جهاز التحليل.

إذا كانت الضوابط خارجة عن النطاق فلا تقم بتقديم نتائج المريض إلا بعد حل المشكلة حيث يتم إعادة تحليل عينات المريض باستخدام عينات الرقابة النوعية في إطار نطاق يمكن قبوله.

2- يتم التعبير عن التغير في صورة الانحراف المعياري ومعامل الاختلاف ويتم توضيحه من خلال مخطط بياني لتقييم الجودة يسمى Levy-Jennings graph.

 الإجراء:

 

المصل الشفاف

عينة المصل

المعيار

الكاشف الشفاف

الكاشف 1

2 مل

2 مل

2 مل

2 مل

يحتضن لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة 37 مئوية

المصل

-

50 ميكرولتر

-

-

الكاشف 2

-

-

50 ميكرولتر

-

يحتضن لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة 37 مئوية

الكاشف 3

0.5 مل

0.5 مل

0.5 مل

0.5 مل

يخلط جيدًا

الكاشف 4

0.5 مل

0.5 مل

0.5 مل

0.5 مل

المصل

0.5 ميكرولتر

-

-

-

D.W.

-

-

-

50 ميكرولتر

اخلط جيدًا وانتظر لمدة 10 دقائق في مكان مظلم، اقرأ عند 510 نانومتر مقابل القيمة في خانة فارغ.

- الحساب:
تركيز الفسفاتاز القلوي = الكثافة البصرية للمصل/الكثافة البصرية للمعاير * تركيز المعيار.

- التخاطط: حتى 285 وحدة/لتر
- القيمة المرجعية: 
الأطفال من 17 إلى 142 وحدة/لتر
البالغين من 21 إلى 92 وحدة/لتر 
معامل التحويل: kau/ديسيلتر * 7.09 = وحدة/لتر.


0 تعليقات:

إرسال تعليق