اختبار غلوكوز الدم.. تحديد الغلوكوز بعد التأكسد الإنزيمي في وجود أكسيداز الغلوكوز

‎‎الغلوكوز هو المصدر الرئيسي للطاقة في الجسم.

ويتم إحداث التوازن بمستويات هذا المركب من خلال هضم الكربوهيدرات وامتصاصها في الأمعاء وتخزينها في الكبد وتحريرها منه واستخدامها في العضلات.

أسباب فرط سكر الدم:

- نوع معتمد على الإنسولين (IDDM).

- نوع غير معتمد على الإنسولين (NIDDM).

- السكري غير المعتمد على الإنسولين لغير السِمان.

- السكري غير المعتمد على الإنسولين للسِمان.

- السكري الحملي.

- ‎‎نقص تحمل الغلوكوز:‎‎

يرتبط نقص الغلوكوز بحالات محددة و متلازمات مثل (التهاب البنكرياس المزمن المصحوب بقصور في الإفرازات الداخلية والإفرازات الخارجية ومتلازمة كوشنج وضخامة النهايات)‎‎.

أسباب نقص سكر الدم:

- نقص إنتاج الغلوكوز.

- نقص سكر الدم الكيتوني.

- داء اختزان الغليكوجين.

- نقص إنزيم تخليق الغلوكوز.

- وجود الغالاكتوز في الدم.

- عدم التحمل الوراثي للفركتوز.

- فرط تحسس اللوسين.

- فرط الأنسولينية الداخلية.

يتحدد الغلوكوز بعد التأكسد الإنزيمي في وجود أكسيداز الغلوكوز.

يتفاعل بيروكسيداز الهيدروجين المتكون، تحت تحفيز البيروكسيداز، مع الفينول و4- أمينوبيرين لتكوين صبغة كوينون إيمين باللون الأحمر-البنفسجي.

وتتناسب كثافة اللون المتكون طرديًا مع تركيز الغلوكوز في العينة. 

Glucose + O2+H2O --------------GOD ـــــــــــH2O2 + Gluconate

‎‎2H2O2+ Phenol+ 4-Amino-antipyrine ـــــــــH2O+ Quinonimine

العينة:

يمكن استخدام المصل أو بلازما بالهيبارين أو بلازما بالفلوريد.

يتعين فصل عينات البلازما أو المصل التي لا تحتوي على مواد حافظة من الخلايا أو الكتلة الدموية في غضون نصف ساعة من سحب العينة.

يستقر الغلوكوز الموجود في مصل مفصول غير منحل الدم لمدة تصل إلى أربع ساعات عند درجة حرارة 25 درجة مئوية وحتى 24 ساعة عند درجة حرارة 4 درجة مئوية.

الكواشف والمواد:

1- جهاز تحليل آلي بالكامل أو مقياس الطيف الضوئي.

2- جهاز طرد مركزي.

3- أنبوب من الجل (مادة لتسريع التجلط).

4- محافد مقياس الطيف الضوئي.

5-  ماء مزال الأيونات.

6- ممصات.

7- معايير الغلوكوز 20 ملجم/ديسيلتر 100 ملجم/ديسيلتر، 200 ملجم/ديسيلتر، 400 ملجم/ ديسيلتر.

8- كتلة تدفئة أو حمام مائي 37 درجة مئوية.

9- مُوَقِّت 

10- الكواشف:

كاشف 1 محلول منظم	منظم تريس pH 7	‎‎100 ملي مول/ لتر‎‎
	فينول	‎‎0.3 ملمول/ لتر‎‎‎‎
كاشف 2	أكسيداز غلوكوز بيروكسيداز 4-أمينو أنتيبيرين	‎‎10 000 وحدة/ لتر ‎‎1 000 وحدة/ لتر ‎‎2.6 ملي مول/ لتر
كاشف 3	غلوكوز معياري	‎‎100 ملجم/ ديسيلتر

التحضير:

قم بإذابة مسحوق الكاشف 2 باستخدام الكاشف المنظم 1.

الإجراء:

- طول الموجة........ 505 نانومتر (490 إلى 550).

- درجة الحرارة........ 37 درجة مئوية.

	فارغة	المعيار	عينة
المعيار	-	10 ميكرولتر	-
عينة	-	-	10 ميكرولتر
الكاشف العامل	1 مل	1 مل	1 مل

- قم بمزجهم ثم تحضينهم لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة 37 درجة مئوية أو لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (20 إلى 30 درجة مئوية).

- يستقر اللون لمدة 30 دقيقة.

- التخاطط: حتى 500 ملجم/ديسيلتر.

طريقة الحساب:

تركيز الغلوكوز = الكثافة البصرية للعينة / الكثافة البصرية للمعيار * تركيز المعيار.

مراقبة الجودة:

يتم اختبار ضوابط مراقبة المصل من المستويين الأول والثاني مع كل مريض يقوم بالاختبار.

يتراوح نطاق مراقبة المستوى الأول من 70 إلى 85 ملجم/ ديسيلتر، بينما يتراوح المستوى الثاني من 271 إلى 306 ملجم/ديسيلتر.

النتائج:

باستخدام ورقة رسم بياني، قم بتمثيل الامتصاص على المحور الرأسي (المحور y) والتركيز على المحور الأفقي (المحور x) لكل واحد من معياري الغلوكوز.

1- ارسم "الخط الأكثر ملائمة" واستخدم هذا المنحنى القياسي لتحديد تركيز الغلوكوز لضوابط المراقبة وعينات المريض.

2- تحقق من أن نتائج المراقبة مقبولة قبل إبلاغ نتائج المريض.

الفواصل المرجعية:

فيما يلي النطاق المرجعي للغلوكوز:

الحبل السري	‎‎45 إلى 96 ملجم/ ديسيلتر
مبتسر	20 إلى 60 ملجم/ ديسيلتر
حديث الولادة	40 إلى 60 ملجم/ ديسيلتر
1 أسبوع	50 إلى 80 ملجم/ ديسيلتر
طفل	60 إلى 100 ملجم/ ديسيلتر
بالغ	74 إلى 100 ملجم/ ديسيلتر
أكبر من 60 عام	82 إلى 115 ملجم/ ديسيلتر
أكبر من 90 عام	75 إلى 121 ملجم/ ديسيلتر

القيود:

1- يتعين فصل المصل والبلازما من خلايا الدم الحمراء بصورة فورية لمنع تحلل السكر.

سينخفض الغلوكوز 7% تقريبًا في الساعة عندما يترك متلامسًا من الخلايا الحمراء.

2- عندما يكون غلوكوز الدم أقل من غلوكوز المصل بنسبة تتراوح من 12 إلى 15%.

3- ويكون غلوكوز الدم الوريدي أقل من غلوكوز الدم الشرياني أو الشعري بحوالي 5 ملجم/ديسيلتر.