تشخيص طفيلي الملاريا:
صباغة أفلام الدم بصبغة جيمسا:
القاعدة:
أثناء صباغة فلم الدم، يعمل الهيموغلوبين الموجود في كريات الدم الحمراء على إذابة (عملية نزع الهيموغلوبين) وتتم إزالته بواسطة الماء الموجود في محلول الصبغ.
جميع هذه البقايا هي طفيليات وكريات دم بيضاء يمكن رؤيتها تحت المجهر.
الطريقة الأولى: طريقة سريعة لصبغ أفلام الدم السميكة والرقيقة:
هذه الطريقة مناسبة لصباغة الأفلام السميكة بسرعة عند الحاجة إلى نتائج مستعجلة.
ويستخدم فيها صبغة أكثر من الطريقة العادية.
1- باستخدام الملاقط، ضع الشرائح على التوالي في ترفة صبغ.
2- جهز محلول جيمسا بنسبة 3% في ماء منظم أو ماء مقطر، pH 7.2، في كمية كافية لملء عدد ترف الصباغة المستخدمة ثم امزج الصبغة جيدًا.
3- صب الصبغة بلطف في أوعية الصباغة حتى تغطى جميع الشرائح بالكامل. بحيث تتعرض للصبغة لمدة تتراوح من 30 إلى 45 دقيقة بعيدًا عن ضوء الشمس.
4- صب ماءً نظيفًا بلطف في الوعاء لإزالة الرواسب الموجودة على سطح محلول الصباغة .
5- ثم قم بتفريغ الصبغة المتبقية بلطف)، واشطف مرة أخرى في ماء نظيف لثوانٍ قليلة. ثم قم بتفريغ الماء.
الطريقة الثانية:
1- إذا كانت هناك حاجة إلى النتائج بصورة ملحة، يترك الفلم السميك ليجف تمامًا، ويمكن تسريع عملية التجفيف من خلال تعريض الشريحة لمروحة أو تعريض الشريحة لفترة وجيزة لحرارة لطيفة مثل التي تصدر عن مصباح المجهر.
وينبغي توخي الحذر لتجنب الحرارة الزائدة، وإلا سيتم تثبيت الفلم السميك بالحرارة.
2- ثبت الفلم الرقيق من خلال إضافة ثلاث قطرات من الميثانول أو من خلال غمسه في وعاء إيثانول لثوانٍ قليلة.
وللسماح بعملية نزع الهيموغلوبين، يتعين عدم تثبيت الفلم السميك، ومن ثم تجنب تعرض الفلم السميك للميثانول أو بخار الميثانول
3- جهز محلول جيمسا بنسبة 10% في ماء منظم أو ماء مقطر، pH 7.2؛ وإذا تم استخدام كمية قليلة، سوف تعطي ثلاث قطرات من الصبغة لكل مل من الماء المنظم التركيز الصحيح لمحلول جيمسا.
تحتاج الشريحة الواحدة حوالي 3 مل من الصبغة المعدة. امزج الصبغة جيدًا باستخدام قضيب زجاجي.
4- صب الصبغة بلطف على الشرائح أو استخدم أنبوب ممص.
بحيث تتعرض للصبغة لمدة تتراوح من 5 إلى 10 دقائق
5- اغسل الشرائح من الصبغة بلطف من خلال إضافة قطرات من الماء النظيف.
لا تقم بإزالة الصبغة ثم الغسل حيث أن هذا سيترك رواسب من الغثاء فوق اللطاخات.
6- ضع الشرائح في رفرف الشرائح لنزح وتجفيف، مع اتجاه جانب الفلم لسفل، الشرائح من أعلى إلى أسفل، وتأكد من أن الفلم لا يلمس رف الشرائح.
فحص مجهري:
افحص الشريحة تحت المجهر باستخدام تكبير بمعدل ¥100 تكون طفيليات الملاريا الموجودة في الدم في مراحل مختلفة من التطور ويكون لدى بعض طفيليات الملاريا حبيبات صباغية في هيولى خلاياها.
أفلام الدم الرقيقة: في أفلام الدم الرقيقة، قد تبقى كريات الدم الحمراء المصابة غير متغيرة أو لديها ألوان وأشكال مختلفة أو قد تحتوي على بقع ("شوفنر") القرنفلية أو بقع ("جيمس") الحمراء ويمكن استخدام الأفلام الرقيقة للتعرف على عينات طفيليات الملاريا.
ملاحظة:
يمكن رؤية الوحيدات، في المرضى الذين يعانون من الملاريا لفترة طويلة، في فلم الدم الرقيق وغالبًا ما تحتوي خلايا الهيولى على أجسام بنية أو سوداء تميل إلى الخضرة (أليفات الحديد).
وبالنسبة للمرضى الذين تلقوا حقن بعقار مضاد للملاريا، تصبغ الطفيليات العينة بصبغة ذات لون بسيط وتبدو مشوهة وغير واضحة.
أفلام الدم السميكة:
في أفلام الدم السميكة، يتعين أن تكون الخلفية نظيفة وخالية من الحطام حيث أن كريات الدم الحمراء تذوب.
ويتعين أن يكون لدى طفيليات الملاريا كروماتين أحمر غامق أو هيولى أزرق أو أزرق ضارب إلى الأرجواني الباهت.
في الأفلام السميكة المصبوغة بجيمسا، يتعين أن تكون نواة كريات الدم البيضاء مصبوغة بلون أرجواني غامق.
ويمكن رؤية بقع شوفنر حول طفيليات الملاريا.
ويتم استخدام أفلام الدم السميكة لتقدير الكثافة الطفيلية كما هو موضح أدناه.
نتائج التقرير:
إذا كانت نتيجة فحص أفلام الدم المصبوغة موجبة، حدد:
- عينات الطفيليات المكتشفة.
- مرحلة تطور الطفيليات.
- الكثافة الطفيلية.
قد تحتوي أفلام الدم المحتوية على المتصورات البيضاوية والمتصورات النشيطة على طفيليات قليلة ومن ثم تستغرق مزيدًا من الوقت للفحص تحت المجهر.
ومع ذلك من الضروري التمييز بين النوعين، حيث يقد يظهران مرة أخرى في الدم بدون عودة العدوى.
ويحتاج المرضى المصابين بمتصورات الملاريا البيضاوية والمتصورات النشيطة إلى علاج إضافي للقضاء على المراحل الكبدية من هذه الطفيليات.
يمكن لمريض واحد استضافة أكثر من نوع واحد من طفيليات الملاريا في نفس الوقت (على سبيل المثال المتصورات المنجلية ومتصورات الملاريا أو المتصورات المنجلية والمتصورات النشيطة).
وإذا كانت النتيجة سلبية يقدم تقرير "بعدم اكتشاف طفيليات".
ليست هناك تعليقات