فحوصات الدهون.. ثلاثي الجليسريد. الإصابة بالكُلاء والركود الصفرواي والتهاب البنكرياس والتليف والسكري والتهاب الكبد

ثلاثي الجليسريد هو بروتين أساسي في عملية النمو وتكوين الأنسجة الجديدة وإصلاح الأنسجة المصابة.‎

وقد تكون الزيادة في معدلات ثلاثي الجليسريد هى نتيجة الإصابة بالكُلاء والركود الصفرواي والتهاب البنكرياس والتليف والسكري والتهاب الكبد.

يظهر النقص عند سوء التغذية.

‎ يعتمد التحليل على التميؤ الإنزيمي لثلاثي الجليسريد مع وجود إنزيمات الليباز في كينون إيمين المكونة من بيروكسيد الهيدروجين المستخدم كمؤشر ملون.

وتكون كثافة اللون تناسبية لكمية ثلاثي الجليسريد الموجودة في العينة.

يتم أخذ عينة مريض مقدراها 10 ميكرولتر ويتم دمجها وتحضينها مع كمية من المحلول مقداره 1000 ميكرولتر محتوية على مركب 4-أمينوأَنتيبيرين ومركب 4-كلوروفينول في وجود بيروكسيد الهيدروجين.

بعد فترة تحضين تستغرق 10 دقائق يحدث تفاعل بين مركب 4-أمينوأَنتيبيرين ومركب 4-كلوروفينول وبيروكسيد الهيدروجين ينتج عنه تكون الكينون إيمين وهو ناتج‎ ملون.‎

وتكون كمية المركب الملون المتكون تناسبية لكمية ثلاثي الجليسريد في العينة.

العينة:

1- ‎يوصى بأخذ عينة مقدارها 10 ميكرولتر من مصل الدم تحتوي على هيبارين أو بلازما رباعي أسيتيك ثنائي أمين الإيثيلين EDTA)‎). قم بجمع العينات بواسطة تقنية بزل الوريد القياسية.

قد يستخدم الهيبارين كمضاد للتخثر لعينات البلازما.

قم بحفظ العينات في حاويات مغلقة لتجنب حدوث تلوث أو تبخر.

اتبع الاحتياطات العالمية عند القيام بالفصد أو التعامل مع عينات المريض أو ما تم معايرته أو أي منتجات أخرى أساسها هو مصل الدم.

تخلص من المواد الملوثة بالنفايات المسببة للعدوى.

2- ‎تجنب العينات التي بها انحلال في كريات الدم الحمراء.‎ إذا لم يتم إجراء التحليل بشكل فوري يتم تجميد العينات عند درجة حرارة −25 درجة مئوية لمدة تصل إلى 4 شهور أو حفظها في ثلاجة بدرجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 درجات مئوية لمدة تصل لثلاثة أيام.

3- ‎إذا كان التركيز أكبر من مجال جهاز التحليل قم بتخفيف جزء واحد من العينة بأربعة أجزاء من محلول ملحي مساوي التوتر أو ماء مقطر ثم قم بإعادة التحليل.

قم بضرب النتيجة في 5 للحصول على تركيز ثلاثي الجليسريد الأصلي.

الكواشف والمواد:

1- مقياس الضوء.

2- أنبوب من الجل (مادة لتسريع التجلط).

‌3- منبذة.

4- ‎‎الكاشف: أنابيب محلول منظم(pH7.5)....50 ملمول/ لتر‎‎.

- 4-‎‎كلوروفينول....5  ملمول/ لتر.

- 4-أمينو أنتيبيرين....0.25 ملمول/ لتر.

- أيون المغنيزيوم....4.5 ملمول/ لتر.

- ثلاثي فوسفات الأدينوزين....2 ملمول/ لتر‎‎.

- إنزيمات الليباز....≥ 1.3 وحدة/ ملم.

- بيروكسيداز....≥0.5 وحدة/ ملم.

- جليسيرول كيناز....≥ 0.4 وحدة/ ملم.

- جليسيرول-3-فوفسات الأوكسيداز.... ≥1.5 وحدة/ ملم.

- ثلاثي جليسريد قياسي....2.28 ملمول/لتر.

المعايرة:

1- ‎‎‎تفريغ وغسيل الكوفيت المتدفق من خلال الضغط على [WASH] الموجود على شاشة LCD‎‎‎. سوف يحدث رجوع تلقائي لقائمة التحديد.

2- ادفع كمية صغيرة من خلال الضغط على الرافعة [P] لتفريغ نظام الأنبوب.‎ لا تقم بسكب أي محلول.

3- قم بقياس 1000 ميكرولتر على وجه التحديد من الماء في كوب عينة ثم اسكب الماء المقطر بدفع كمية بالضغط على الرافعة [P].

سوف يتم تلقائيًا قياس 1000 ميكرولتر من حجم الكمية المسكوبة في الكوفيت المتدفق.

4- سوف يتم عرض مدة الانتقال الخاصة بالهواء والماء على الشاشة.

5- ‎‎اضغط [↵] لإنهاء عملية المعايرة.‎‎ سوف يعود البرنامج إلى قائمة التحديد.

مراقبة الجودة:

1- ‎عند بداية كل نوبة عمل قم بتفعيل مواد مراقبة الجودة على المجالات الطبيعية وغير الطبيعية (ضوابط رقابية عالية ومتدنية)‎.

اعمل دائمًا على تفعيل مجموعة من الضوابط الرقابية بعد معايرة جهاز التحليل.

إذا كانت الضوابط خارجة عن النطاق فلا تقم بتقديم نتائج المريض إلا بعد حل المشكلة حيث يتم إعادة تحليل عينات المريض باستخدام عينات مراقبة الجودة في إطار نطاق مقبول.

‌2- يتم التعبير عن التغير في صورة الانحراف المعياري ومعامل التغيير ويتم توضيحه من خلال مخطط بياني لتقييم الجودة يسمى Levy-Jennings graph.

الإجراء:

1- امزج أنبوبين أحدهما فارغ بكمية مقدارها 1000 ميكرولتر من الكاشف المعياري والأنبوب الثاني بكمية مقدارها 10 ميكرولتر من مصل الدم أو البلازما و1000 ميكرولتر من محلول الكاشف.

2- امزج كل منهما جيدًا ثم يتم تحضينهم لمدة 5 دقائق بدرجة حرارة 37 درجة مئوية ثم قم على الفور بقياس مدى امتصاص الكاشف المعياري والعينة وفقًا لما هو مشار إليه.

‌3- ‎‎اضغط على ZERO ثم أضف كمية صغيرة من خلال الضغط على الرافعة [P] لسكب الماء وتفريغ النظام.‎‎

4- عندما يتم عرض MEASURE RB على الشاشة قم بوضع الكوفيت الذي به محلول خاوي في حامل الكوفيت ثم قم بشفط المحلول الخاوي بدفع الرافعة [P]

5- عندما يتم عرض MEASURE SAMPLE على الشاشة قم بتثبيت الكوفيت المحتوي على محلول العينة في حامل الكوفيت ثم قم بشفط محلول العينة بدفع الرافعة [P].

6- ‎‎‎اضغط على [RESULT] وترقب لمهلة محتملة بينما يتم قياس محلول العينة.‎‎‎ سوف يتم عرض النتيجة على السطر الأعلى.

7- ‎‎‎قم بطبع النتائج أو تدوينها.‎‎‎ ‎‎‎اضغط على [WASH] لسكب محلول الشطف أو اضغط [MEASURE] لقياس العينة التالية بواسطة دفع رافعة السكب [P]‎‎‎.

طرق الحساب:

يتم تقديم النتائج بوحدة ملمول/لتر.واستخدام طريقة حساب أخرى هو أمر غير ضروري إلا إذا تم تخفيف العينة.

النتائج:

1- ‎القيم المتوقعة:‎ 0.11-2.15 ملمول/لتر.

2- يجب على كل مختبر أن يؤكد تلك القيم.

القيود:

1- العينات الدهنية تعمل على توليد تعكر في مزيج كاشف العينة وهو ما يؤدي إلى نتائج مرتفعة مغلوطة.

2- الأسكوربات يعطي قيمًا متدنية مغلوطة.