فحوصات الدهون.. كوليستيرول الدهون عالية الكثافة. البروتين الشحمي رفيع الكثافة



البروتين الشحمي رفيع الكثافة هو بروتين شحمي يشارك في نقل الكوليستيرول من الخلايا إلى الكبد.‎‎‎
وقد تكون الزيادة في معدلات البروتين الشحمي رفيع الكثافة هي نتيجة الإصابة بالكُلاء والركود الصفرواي والتهاب البنكرياس والتليف والسكري والتهاب الكبد.
كما يظهر النقص في حالة سوء التغذية.

‎‎‎ يعتمد التحليل على ترسب الكيلومكرونات والبروتين الشحمي وضيع الكثافة والبروتين الشحمي منخفض الكثافة وذلك عند إضافة حمض الفسفوتنجستيك وكلوريد المغنيزيوم إلى العينة.‎‎‎

البروتين الشحمي رفيع الكثافة هو جزء من المادة الطافية والذي يمكن فحصه إنزيميًا بعد تنبيذ المادة الطافية. امتصاص العينة والكاشف المعياري يتم قياسه مقابل الكاشف الخاوي.

‎‎‎عندما يتم المزج بين 200 ميكروجرام من عينة الاختبار مع 500 ميكروجرام من الكاشف المترسب الذي يحتوي على حمض الفسفوتنجستيك وكلوريد المغنيزيوم في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق يتم ترسيب الكيلومكرونات والبروتين الشحمي وضيع الكثافة والبروتين الشحمي منخفض الكثافة.‎‎‎

إن التنبيذ بسرعة تبلغ 10000 جي لمدة دقيقتين يجعل البروتين الشحمي رفيع الكثافة هو فقط الموجود بالمادة الطافية حيث يتم تحديد تركيزه في العينة إنزيميًا.

العينة:
1- يوصى بأخذ عينة مقدارها 200 ميكرولتر من مصل الدم تحتوي هيبارين أو بلازما رباعي أسيتيك ثنائي أمين الإيثيلين (EDTA).‎‎‎

قم بجمع العينات بواسطة تقنية بزل الوريد القياسية.
قد يستخدم الهيبارين كمضاد للتخثر لعينات البلازما. قم بحفظ العينات في حاويات مغلقة لتجنب حدوث تلوث وتبخر.

اتبع الاحتياطات العالمية عند القيام بالفصد أو التعامل مع عينات المريض أو ما تم معايرته أو أي منتجات أخرى. تخلص من المواد الملوثة بالنفايات المسببة للعدوى.

2- إذا كانت المادة الطافية غير صافية فقم بتخفيف العينة قبل الترسيب بنسبة 1:1 بواسطة محلول ملحي نظامي ثم قم بضرب النتائج في 2 للحصول على التركيز الأصلي للبروتين الشحمي رفيع الكثافة.

3- يبقى كوليستيرول الدهون عالية الكثافة مستقرًا في مصل الدم لمدة 6 أيام في درجة حرارة تتراوح من 4 إلى 25 درجة مئوية ولمدة 4 أشهر عند درجة حرارة –20 درجة مئوية.
مصل الدم يجب أن يتم فصله من تجلط الدم بأسرع ما يمكن.

 الكواشف والمواد:
1- مقياس الضوء 
2- أنبوب من الجل (مادة لتسريع التجلط) 
‌3- منبذة
4- كاشف (مرسب):
- حمض الفسفوتنجستيك ----- 0.55 ملمول/لتر
‎‎‎- كلوريد المغنيزيوم ------ 25 ملمول/لتر‎‎‎
‎‎‎- الكوليستيرول ----- 1.29 ملمول/لتر‎‎‎

المعايرة:
1- ‎‎‎تفريغ وغسيل الكوفيت المتدفق من خلال الضغط على [WASH] الموجود على شاشة LCD‎‎‎. سوف يحدث رجوع تلقائي لقائمة التحديد.

2- ‎‎ادفع كمية صغيرة من خلال الضغط على الرافعة [P] لتفريغ نظام الأنبوب.‎ لا تقم بسكب أي محلول.

3- ‎‎قم بقياس 1000 ميكرولتر على وجه التحديد من الماء المقطر في كوب عينة ثم اسكب الماء المقطر بدفع رافعة السكب "P".
سوف يتم تلقائيًا قياس 1000 ميكرولتر من حجم الكمية المسكوبة في الكوفيت المتدفق.

4- سوف يتم عرض مدة الانتقال الخاصة بالهواء والماء على الشاشة.
5- ‎‎اضغط [↵] لإنهاء عملية المعايرة.‎‎ سوف يعود البرنامج إلى قائمة التحديد.

مراقبة الجودة:
1- ‎عند بداية كل نوبة عمل قم بتفعيل مواد رقابة الجودة على المجالات الطبيعية وغير الطبيعية (ضوابط رقابية عالية ومتدنية)‎. 
اعمل دائمًا على تفعيل مجموعة من الضوابط الرقابية بعد معايرة جهاز التحليل.

إذا كانت الضوابط خارجة عن النطاق فلا تقم بتقديم نتائج المريض إلا بعد حل المشكلة حيث يتم إعادة تحليل عينات المريض باستخدام عينات مراقبة الجودة في إطار نطاق مقبول.

2- يتم التعبير عن التغير في صورة الانحراف المعياري ومعامل التغيير ويتم توضيحه من خلال مخطط بياني لتقييم الجودة يسمى Levy-Jennings graph.

الإجراء:
1- امزج 200 ميكرولتر من عينة الاختبار (مصل الدم أو البلازما) مع 500 ميكرولتر من الكاشف المترسب في أنبوب طرد مركزي زجاجي.‎‎‎ ‎‎‎(خفف الكاشف المترسب بماء مقطر 4 في 1)‎‎‎

2- امزج بينهم جيدًا ثم يتم تحضينهم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
3- قم بالنبذ بمعدل 4000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق أو 10000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين.

4- ‎‎‎بعد التنبيذ قم بإزالة المادة الطافية الصافية في الأنبوب 1 (العينة)‎ ثم أضف 100 ميكرولتر من المادة الطافية و1000 ميكرولتر من كاشف الكوليستيرول الكلي.‎‎
في الأنبوب 2 (الكاشف الخاوي) اضف 100 ميكرولتر من الماء المقطر و1000 ميكرولتر من كاشف الكوليستيرول.

5- امزج بينهم جيدًا ثم يتم تحضينهم لمدة 10 دقائق عند رجة حرارة تتراوح بين 20 إلى 25 درجة مئوية أو لمدة 5 دقائق عند درجة حرارة 37 درجة مئوية ثم قم بقياس الامتصاص الخاص بهم.

6- ‎‎‎عندما يتم عرض MEASURE BLANK على الشاشة اضغط ZERO  ثم أضف كمية صغيرة من خلال الضغط على الرافعة [P] لسكب الماء وتفريغ النظام.‎‎‎

7- عندما يتم عرض MEASURE RB على الشاشة قم بوضع الكوفيت الذي به محلول خاوي في حامل الكوفيت ثم قم بشفط المحلول الخاوي بدفع الرافعة [P]

8- عندما يتم عرض MEASURE SAMPLE على الشاشة قم بتثبيت الكوفيت المحتوي على محلول العينة في حامل الكوفيت ثم قم بشفط محلول العينة بدفع الرافعة [P].

9- ‎‎‎اضغط على [RESULT] وترقب لمهلة محتملة بينما يتم قياس محلول العينة.‎‎‎
سوف يتم عرض النتيجة على السطر الأعلى.

10- قم بطبع النتائج أو تدوينها.‎‎‎ ‎‎‎اضغط على [WASH] لسكب محلول الشطف أو اضغط [measure] لقياس العينة التالية بواسطة دفع رافعة السكب [P]‎‎‎.

 طرق الحساب:
يتم تقديم النتائج بوحدة ملمول/لتر.واستخدام طريقة حساب أخرى هو أمر غير ضروري إلا إذا تم تخفيف العينة.

النتائج:
1- ‎القيم المتوقعة:‎ 0-0.9 ملمول/لتر.
2- يجب على كل مختبر أن يؤكد تلك القيم.

القيود:
1- عندما يتداخل مستوى عالي من ثلاثي الجليسريد مع مقياس البروتين الشحمي رفيع الكثافة خفف العينة قبل الترسيب بنسبة 1:1 بمحلول ملحي بنسبة 0.9% ثم اضرب النتائج في 2.

‌2- سوف تعطي تركيزات حامض الأسكوربيك العالية (> 2.5 ملجم/ديسيلتر) نتائج متدنية.

3- تتداخل معدلات الهيموغلوبين التي هي أعلى من 100 ملجم/ديسيلتر ومعدلات البيليروبين التي هى أعلى من 10 ملجم/ ديسيلتر مع الاختبار.


0 تعليقات:

إرسال تعليق