المقوسات القندية عبارة عن طفيل أولي داخل الخلية ذي انتشار واسع.
على الرغم من أن القطط هي المضيف النهائي إلا أن العدوى البشرية تنتج من ابتلاع تربة ملوثة أو التعامل مع فضلات القطط أو ابتلاع لحم نيئ أو غير مطهي أو الانتقال من الأمم إلى الجنين عبر المشيمة.
عندما تصاب المرأة سلبية المصل بداء المقوسات القندية أثناء الحمل، ففي الغالب ينتقل الكائن الحي إلى الجنين.
قد تؤدي الإصابة خلال أول ثلاثة أشهر إلى الإجهاض التلقائي أو الإملاص أو حدوث أمراض للمولود.
أدوات IgG الخاصة بداء المقوسات عبارة عن ELISA سريعة تختص بالكشف الكمي أو الوصفي للأجسام المضادة IgG لداء المقوسات القندية في المصل البشري.
قاعدة الاختبار:
يحتضن مصل مخفف أو عينات بلازما (1:100) لمدة 20 دقيقة للسماح للأجسام المضادة النوعية لداء المقوسات القندية بتقييد الأوعية المغطاة بالمستضدات.
بعد غسل الأجسام المضادة المفككة ومكونات المصل الأخرى، يُكتشف وجود IgG النوعي لداء المقوسات القندية باستخدام IgG المضاد للبشر من الأرانب المتقارن مع بيروكسيداز ﻓﺟﻝ ﺍﻟﺧﻳﻝ.
بعد الحضن لمدة 20 دقيقة، يزال المتقارن المفكك من خلال الغسل وتضاف ركيزة إنزيم TMB لمدة 10 دقائق. يتكون لون أزرق عند وجود أجسام مضادة لداء المقوسات القندية.
إضافة محلول إيقاف يعطي لونا أصفرا وتقاس الكثافات البصرية لعناصر التحكم والمعايير والعينات باستخدام قارئ صفيحة صغيرة.
المواد:
1- 96 وعاء بصفائح صغيرة في أشرطة منفصلة مقاس 12 × 8، مغطاة بمستضدات داء المقوسات القندية المطهرة، غني بمستضد P30.
2- كاشف 1: عينة مخففة 100 مم، محلول ملح ثلاثي الدارئات، الأس الهيدروجيني 7.2 مع مركب مضاد للميكروبات، 10 ملليلتر (أزرق)، تركيز (x10).
3- كاشف 2: دارئة غسيل 100 مم، محلول ملح ثلاثي الدارئات مع منظف، الأس الهيدروجيني 7.2 100 ملليلتر، تركيز (x10).
4- كاشف 3: المتقارن (بروكسيداز متقارن مع IgG مضاد للبشر من الأرانب)، 12 ملليلتر، (أحمر)، جاهز للاستخدام.
5- كاشف 4: ركيزة TMB، 12 ملليلتر، جاهزة للاستخدام.
6- كاشف 5: محلول إيقاف، 12 ملليلتر، جاهزة للاستخدام.
7- المعيار 1: (للمقايسات الكمية)، 15 وحدة دولية/ميكرولتر، 50 وحدة دولية /ميكرولتر؛ 150 وحدة دولية/ميكرولتر (أزرق)، جاهزة للاستخدام.
8- المعيار 1: (للمقايسات الوصفية) 8 وحدة دولية/ميكرولتر، (أصفر)، جاهزة للاستخدام.
-9 عنصر التحكم الإيجابي 1: 100 وحدة دولية/ميكرولتر (أحمر)، 1 ملليلتر، جاهزة للاستخدام.
10- عنصر التحكم السلبي: 1 ملليلتر (أخضر)، 1 ملليلتر، جاهزة للاستخدام.
11- ماء مقطر أو غير مؤين.
المعدات:
1- أنبوب 10 مم × 60 مم للتخفيف.
2- ممصات 10 ميكرولتر، 100 ميكرولتر، 1000 ميكرولتر.
3- مستوزع دوري 100 ميكرولتر،
4- قارئ صفائح صغيرة بالإضافة إلى مرشح نانومتر 450.
5- جهاز غسيل الصفائح الصغيرة.
العينات:
في هذه المقايسة لا تستخدم إلا الأمصال أو البلازما المثلجة المأخوذة حديثًا وبشكل سليم.
تجنب الأمصال التي بها انحلال الدم أو الدهنية أو الملوثة بكتيريا.
تخزن الأمصال في درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 مئوية لمدة لا تزيد عن 5 أيام.
عند توقع حدوث تأخير في إجراء الاختبار، خزن مصل الاختبار عند –20 مئوية.
تجنب دوائر إذابة المتجمد المتكررة.
الطريقة:
تأكد من وجود جميع المواد في درجة حرارة الغرفة قبل بدء الإجراء.
ننصح بأن تعمل المعايير وعناصر التحكم دائمًا بشكل مزدوج.
تعمل العينات بشكل فردي أو مزدوج.
1- جمع عدد الشرائط المطلوبة للمقايسة.
2- يحتوي تركيز مخفف العينة X10 على 0.09% من أزيد الصوديوم كمادة حافظة.
جهز مخفف قوة العمل كافٍ لإجراء المقايسة.
إلا أنه إذا لزم تخزين مخفف قوة العمل لمدة تزيد عن أسبوع واحد، فأضف أزيد الصوديوم (0.9 جرام/لتر).
خزن مخفف العينات غير المستخدمة عند درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 درجات مئوية.
خفف مخفف العينة (كاشف 1) بنسبة 1:9 في ماء مقطر لتحقيق دارئة كافية لإجراء المقايسة.
على سبيل المثال، أضف تركيز 10 ملليلتر لمخفف العينة إلى 90 ملليلتر ماء.
3- خفف عينات المرضى بنسبة 1:100 (على سبيل المثال، 5 ميكرو لتر مصر بالإضافة إلى 0.5 ملليلتر مخفف).
من المهم توزيع جميع العينات وعناصر التحكم في الأوعية بدون تأخير.
لذا تأكد من جاهزية جميع العينات للتوزيع.
4- بالنسبة للتعيينات الوصفية، وزع 100 ميكرولتر من عنصر التحكم السلبي والمعيار 8 وحدة دولية/ مجم وعنصر التحكم الإيجابي وعينة المريض المخفف في الأوعية.
بالنسبة للتعيينات الكمية، استخدم مخفف العينات بنسبة 0 وحدة دولية/ مجم ووزع المعايير 15 وحدة دولية/ مجم و50 وحدة دولية/مجم و150 وحدة دولية/مجم.
5- ضع الأشرطة في حقيبة الحضن وقم بالحضن لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
أثناء جميع عمليات الحضن، تجنب ضوء الشمس المباشر وابتعد عن أي مصدر للحرارة.
6- خفف دارئة الغسيل (كاشف 2) بنسبة 1: 9 في ماء مقطر لتحقيق دارئة كافية لإجراء المقايسة.
على سبيل المثال، أضف 50 مجم من تركيز دارئة الغسيل إلى 450 ملليلتر ماء.
دارئة الغسيل المخففة مستقرة لشهرين عند درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 درجات مئوية.
7- بعد 20 دقيقة، اسكب أو انضح محتويات الوعاء واغسل الأوعية 3 مرات باستخدام غسول صفائح تلقائي أو طريقة الغسيل اليدوية (انظر أدناه).
الغسيل الجيد هو أساس النتائج الجيدة. امسح الأوعية بورق ماص قبل المتابعة. لا تترك الأوعية حتى تجف تمامًا.
طريقة الغسيل اليدوية:
فرغ الأوعية بقلبها.
باستخدام ممص متعدد القنوات أو اغسل الزجاجة، املأ الأوعية بدارئة الغسيل.
فرغ بالقلب وامسح الأوعية بورق ماص.
كرر عملية الغسيل هذه مرتين أخريين.
8- وزع 100 ميكرولتر من المتقارن (كاشف 3) في كل وعاء.
هذا الكاشف بلون أحمر مرمز.
اجعل جميع الممصات والمعدات الأخرى المستخدمة في المتقارن منفصلة تمامًا عن كاشف ركيزة TMB! قم بحضن الأوعية لمدة 20 دقيقة في حقيبة الحضن في درجة حرارة الغرفة.
-9 بعد 20 دقيقة، تخلص من محتويات الأوعية واغسل الأوعية بعناية أربع مرات باستخدام دارئة غسيل.
تأكد من غسل جميع الأوعية بشكل كامل.
امسح الصفيحة الصغيرة بورق ماص لإزالة القطرات الأخيرة من سائل الغسيل.
لا تترك الأوعية حتى تجف تمامًا.
-10 باستخدام مستوزع دوري، بسرعة قم بتوزيع 100 ميكرولتر من ركيزة TMB (كاشف 4) في كل وعاء.
قم بحضن الصفيحة لمدة 10 دقائق.
-11 أضف 100 ميكرولتر من محلول الإيقاف (كاشف 5) إلى كل وعاء.
للسماح بعدد متساوٍ من مرات التفاعل، يتعين إضافة محلول الإيقاف إلى الأوعية بنفس الترتيب مثل ركيزة TMB.
12- اقرأ الكثافة البصرية في قارئ الصفحات الصغيرة خلال 10 دقائق.
التفسير:
- تعيينات وصفية:
+ العينات السلبية: OD < 8 وحدة دولية/مجم OD
+ العينات الإيجابية: OD >/= 8 وحدة دولية/مجم OD
- تعيينات كمية:
ارسم مخطط يوضح الكثافات البصرية للمعايير بالمقارنة مع التركيزات المرتبطة بها.
ارسم خطا يصل بين النقاط. اقرأ التركيزات المجهولة من الرسم البياني.
التركيزات الأقل من 8 وحدة دولية/مجم تعتبر سلبية والتركيزات الأعلى من 8 وحدة دولية/ مجم تعتبر إيجابية بالنسبة إلى IgG لداء المقوسات.
تشير النتيجة السلبية إلى عدم وجود عدوى حالية أو سابقة بالنسبة لداء المقوسات القندية.
من المفترض أن يكون هؤلاء الأفراد عرضة إلى العدوى الأساسية.
ومع ذلك اطلع على القيود الموجودة أدناه.
تشير النتيجة الإيجابية إلى وجود عدوى حالية أو سابقة بالنسبة لداء المقوسات القندية.
ليست هناك تعليقات