اختبار TPHA (اختبار التراص الدموي للولبية الشاحبة):
- القاعدة:
إن اختبارات الفحص المصلي لمرض الزهري باستخدام الكارديوليين والليستين كمستضدات تكون سهلة الأداء ولكن تكون هناك تفاعلات إيجابية بيولوجية كاذبة بشكل متكرر لأن الاختبارات تعتمد على مستضدات غير لولبية.
تستخدم كواشف TPHA للكشف عن المصل البشري للجسم المضاد للولبية الشاحبة بواسطة طريقة التراص الدموي غير المباشر.
خلايا الطيور الحمراء المحفوظة تكون مغطاة بمكونات مستضدية لممراض اللولبية الشاحبة.
تتراص خلايا الاختبار في وجود أجسام مضادة محددة للشاحبة اللولبية وتظهر نماذج مطابقة في هيئة صفيحات معايرة دقيقة.
يتم الكشف عن أية تفاعلات غير محددة تحدث باستخدام خلايا التحكم والتي هي عبارة عن خلايا دم حمراء طيرية غير مغطاة بمستضدات اللولبية الشاحبة.
يمكن أيضًا أن يتم امتصاص التفاعلات غير المحددة باستخدام خلايا التحكم.
الأجسام المضادة للولبيات غير الممرضة يتم امتصاصها بواسطة استخلاص للولبيات رايتر الموجودة في تعليق الخلية.
يتم الحصول على نتائج الاختبارات في فترة من 45 إلى 60 دقيقة ونماذج تراص الخلية تكون سهلة القراءة وتدوم لفترة طويلة.
تبين أن اختبار التراص الدموي للولبية الشاحبة (TPHA) يكون اختبارا مناسبًا ونوعيًا لتشخيص العدوى اللولبية حيث يمتاز بالنوعية والحساسية مقارنة باختبار FTA-ABS (اختبار امتصاص ضد اللولبيات التألقي).
يتطلب الاختبار الحد الأدنى من الأجهزة المعملية وهو شديد البساطة في تنفيذه.
- المادة:
1- خلايا الاختبار؛ كرية حمراء طيرية محفوظة وحساسة للمستضد اللولبي الشاحب.
2- خلايا التحكم؛ كرية حمراء طيرية محفوظة.
3- مخفف.
4- مصل عنصر التحكم الإيجابي؛ (مخفف بنسبة 1:20). هذا يعطي عيارا مكافئا هو 1/640:/2560 في الاختبار الكمي.
5- مصل عنصر التحكم غير التفاعلي؛ (مخفف بنسبة 1:20).
6- ممصات دقيقة لتحقيق 102575 و190 ميكرولتر.
7- شرائح معايرة دقيقة مع وعاء على شكل حرف U.
- الإجراء:
- طريقة وصفية:
كل عينة تتطلب ثلاثة أوعية من صفائح المعايرة الدقيقة.
1- أضف 190 ميكرولتر من المخفف للوعاء 1.
2- أضف 10 ميكرولتر من المصل للوعاء 1.
3- باستخدام ممص دقيق، اخلط محتويات الوعاء 1 وانقل 25 ميكرولتر إلى الوعائين 2 و3.
4- تأكد من إعادة تعليق خلايا الاختبار وخلايا التحكم تماما.
أضف 75 ميكرولتر من خلايا التحكم إلى الوعاء 2. أضف 75 ميكرولتر من خلايا الاختبار إلى الوعاء 3.
5- المس الصفيحة برفق لخلط المحتويات تمامًا.
6- قم بالحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة تتراوح بين 45 و60 دقيقة. (ابعد الصفيحة عن الحرارة وضوء الشمس المباشر وأي مصدر اهتزاز آخر).
7- اقرأ النتائج. تكون النتائج مستقرة لمدة 24 ساعة إذا تم تغطية الصفيحة وتم مراعاة الاحتياطات المذكورة أعلاه.
- اختبار كمي:
كل عينة تتطلب 8 أوعية من صفائح المعايرة الدقيقة. وضع ملصقات على الأوعية من A إلى H.
1- أضف 25 ميكرولتر من المخفف إلى الأوعية من B إلى H.
2- انقل 25 ميكرولتر من المصل المخفف بنسبة 1:20 من اختبار الفحص إلى الوعائين A وB.
3- خذ 25 ميكرولتر من المصل المخفف من الوعاء B وكذلك بالتسلسل 25 ميكرولتر من الأوعية من B إلى H، مع طرح 25 ميكرولتر من المصل المخفف من الوعاء H.
4- تأكد من إعادة تعليق خلايا الاختبار تمامًا.
أضف 75 ميكرولتر من خلايا الاختبار إلى الأوعية من A إلى H.
سيؤدي ذلك إلى تخفيف المصل بنسبة 1/ 80 في الوعاء A وتصل إلى 1/ 10240 في الوعاء H.
5- قم بهز الصفيحة برفق لخلط المحتويات تمامًا.
6- قم بالحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة تتراوح بين 45 و60 دقيقة (ابعد الصفيحة عن الحرارة وضوء الشمس المباشر وأي مصدر اهتزاز آخر).
7- اقرأ النتائج.
تكون النتائج مستقرة لمدة 24 ساعة إذا تم تغطية الصفيحة وتم مراعاة الاحتياطات المذكورة أعلاه.
الجدول 1: نتائج اختبار التراص الدموي للولبية الشاحبة (TPHA):
|
النتائج
|
خلايا الاختبار |
خلايا التحكم |
|
إيجابية قوية |
نمط الخلايا الكامل يغطي قاع الوعاء. |
لا يوجد زر إحكام التراص |
|
إيجابية ضعيفة |
يغطي نمط الخلايا حوالي 1/3 من قاع الوعاء |
لا يوجد زر إحكام التراص |
|
متوسط |
يوضح نمط الخلايا مركزًا مفتوحًا بشكل مميز |
لا يوجد زر إحكام التراص |
|
سلبية |
الخلايا مستقرة عند قاع المكتنز، وفي الوضع الأمثل مع مركز واضح صغير. |
لا يوجد زر إحكام التراص |
|
غير معين * |
تفاعل إيجابي |
تفاعل إيجابي |
1- أضف 100 ميكرولتر من مصل الاختبار إلى أنبوب صغير ثم أضف 400 ميكرولتر من خلايا التحكم.
اخلط الوعاء ثم انتظر لمدة ساعة واحدة.
2- قم بالنبذ لمدة 15 دقيقة بمعدل 1000 دورة في الدقيقة واختبر المادة الطافية من خلال طريقة وصفية.
ملاحظة:
العينة الآن عند نسبة 1/5، يتعين أخذ ذلك في الاعتبار عند تحضير المخففات.
إذا كانت النتيجة متكررة وغير معينة، يتعين اختبار العينة من خلال طريقة أخرى. على سبيل المثال FTA-ABS.
- تفسير النتائج:
تفاعلات إيجابية قوية توضح بعض الثنيات الموجودة بحافة جدار الخلية.
عندما يكون وعاء الاختبار إيجابيا، يتعين مراقبة وعاء التحكم.
يتعين أن تستقر خلايا التحكم عند زر المكتنز.
يتعين استخدامها كمقارنة خاصة بأنماط المصل غير التفاعلي حيث أن خلايا التحكم ستعطي أنماط مكتنز أكثر من خلايا الاختبار.
يشير التراص في وعاء التحكم إلى وجود راصات في العينة، يتعين توصيف الاختبار على أنه غير صالح.
المصل الذي يعطي هذه النتيجة قد يمتص باستخدام خلايا التحكم وفق الوارد وصفه في الامتصاص غير المحدد.
التفاعل المشكوك فيه مع خلايا الاختبار يتعين وصفه على أنه غير نهائي.
تعطي هذه النتيجة مستوى منخفض من الأجسام المضادة في الاختبار الأساسي المبكر للزهري واليوز.
ينبغي أولاً إعادة اختبار هذه العينة في الاختبار الوصفي ثم اختبار عينة أخرى في وقت لاحق لتحديد مدى وجود ارتفاع في العيار.
ينصح أيضا بتنفيذ اختبار تأكيد آخر (FTA-ABS) لإكمال ملف مصل الاختبار.
ليست هناك تعليقات