أنزيم بوليفينول أوكسيديز Polyphenol Oxidase
الغرض من التجربة:
1- متابعة نشاط الأنزيم من مستخلص خام محضر من البطاطا.
2- الكشف عن الطبيعة الكيميائية للأنزيم.
3- دراسة الخصوصية الأنزيمية تجاه المادة الأساس.
4- دراسة أثر درجات الحرارة المختلفة على نشاط الأنزيم.
التفاعلات الأنزيمية:
عندما نضع في اعتبارنا التفاعلات الأنزيمية في الخلية الحية فإن المواد المتفاعلة التي يعمل عليها الأنزيم ليحولها إلى نواتج تسمى المادة الأساس (S).
التفاعلات الأنزيمية تكون عكسية وتتضمن تكوين وسيط هو مركب E-S.
كما أن جزيء الأنزيم الواحد على الرغم من أنه يستطيع أن يتفاعل المرة تلو الأخرى إلا أنه لا يستطيع أن يرتبط إلا مع عدد معين كلي من جزيئات المادة الأساس في الدقيقة الواحدة.
التطابق المستحث:
وهذا يسمى بـ"عدد التحول" Turn over no.
وعدد التحول هذا يختلف من أنزيم لآخر.
تكوين مركب E-S مقيد أو محدود في مساحة صغيرة على جزئ الأنزيم يعرف بالموقع النشط.
فرضية التطابق المستحث تفترض أن الإختلافات في الشكل الثلاثي الأبعاد لسطح الموقع النشط أساسي لخصوصية الأنزيم أي أنه يوجد فقط نوع معين من المادة الأساس التي تستطيع أن تحقق تطابق مع نوع معين من الأنزيم.
تفاعل الأكسدة والاختزال:
في هذه التجربة سوف يتم تحضير مستخلص خام من أنزيم Polyphenol Oxidase.
يحتوي على النحاس، والأس الهيدروجيني الأمثل لنشاطه هو عند 6.7. هذا الأنزيم يعتبر عامل مساعد في عملية الأكسدة لثاني وثلاثي هيدروكسي الفينول إلى quinons
تفاعل الأكسدة والاختزال هذا يصاحبه تغير في اللون، كما أن هذا التفاعل نصادفه كثيراُ في الطبيعة حيث هو المسؤول عن اللون البني الذي يظهر على البطاطا بعد تقشيرها.
الطريقة:
في هذه التجربة فإننا سنتابع تطور التفاعل الأنزيمي بطريقة بسيطة وكيفيتة وذلك فقط بواسطة التغير في اللون وسيعبر عنه كما هو موضح هنا:
- درجة كثافة اللون في أنبوبة الاختبار ــــــــــ الرمز.
- عديم اللون ـــــــ (-).
- لون باهت ــــــــ (+).
- لون واضح ــــــــ (++).
- لون غامق ـــــــــ (+++).
كثافة اللون الناتج يتناسب طردياُ مع النشاط الأنزيمي في أنبوبة الاختبار التي تحت الفحص.
